Conservação de amostras de folha Acrocomia aculeata (Jacq.) Lodd. ex Mart. para obtenção de DNA total de boa qualidade
quinta-feira, maio 30, 2019
Autores: Autores: Suelen Alves Vianna; Raissa Franchi De Oliveira; Carlos Augusto Colombo
Resumo: Estudos moleculares em plantas requerem DNA de boa qualidade. Materiais recém coletados são os mais indicados para esta finalidade. Porém, a extração de DNA nem sempre pode ser realizada logo após a coleta, sendo necessária sua conservação. Com objetivo de encontrar métodos de conservação de folhas de A. aculeata que preservem a qualidade do DNA total foram testados quatro métodos em três repetições: (i) álcool 70%, (ii) FAA50 (formaldeído + ácido acético + álcool 50%), (iii) secagem em estufa a 60oC (procedimento usual em herbários) e (iv) desidratação em sílica.
O controle (C) foi constituído de material fresco. As amostras foram conservadas por 30 dias sob as condições descritas, exceto o controle e o material seco em estufa. Após esse período foram maceradas em nitrogênio líquido e então submetidas ao protocolo de extração de DNA genômico total a partir de 0,1g de material. A integridade do DNA foi observada em gel de agarose 1,0% e o rendimento estimado em espectrofotômetro em comprimentos onda de 260, 280 e 320 nm.
Para avaliar a qualidade de amplificação via PCR foram utilizados três iniciadores do marcador molecular RAPD. Os resultados obtidos (ng.μ L-1) foram: 212±41,93 (i), 34,5±21,74 (ii), 354,83±38,03 (iii), 1024,83±257,38 (iv) e 115,67±49,89 (C). Todos os tratamentos de conservação apresentaram quantidade de DNA suficiente e de boa qualidade para realização de análises por RAPD-PCR, sendo que o melhor método foi o de conservação em sílica.
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Fonte: ResearchGate
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