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Conservação de amostras de folha Acrocomia aculeata (Jacq.) Lodd. ex Mart. para obtenção de DNA total de boa qualidade

quinta-feira, maio 30, 2019

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Autores: Autores: Suelen Alves Vianna; Raissa Franchi De Oliveira; Carlos Augusto Colombo

Resumo: Estudos  moleculares  em  plantas  requerem  DNA  de  boa  qualidade.  Materiais recém coletados são os mais indicados para esta finalidade. Porém, a extração de DNA nem  sempre  pode  ser  realizada  logo  após  a  coleta,  sendo  necessária  sua  conservação. Com  objetivo  de  encontrar  métodos  de  conservação  de  folhas  de A.  aculeata  que preservem a qualidade do DNA total foram testados quatro métodos em três repetições: (i) álcool 70%, (ii) FAA50 (formaldeído + ácido acético + álcool 50%), (iii) secagem em estufa  a  60oC  (procedimento  usual  em  herbários)  e  (iv)  desidratação  em  sílica.  

O controle  (C)  foi  constituído  de  material  fresco. As  amostras  foram  conservadas  por  30 dias sob as condições descritas, exceto o controle e o material seco em estufa. Após esse período  foram  maceradas  em  nitrogênio  líquido  e  então  submetidas  ao  protocolo  de extração de DNA genômico total a partir de 0,1g de material. A integridade do DNA foi observada  em  gel  de  agarose  1,0%  e  o  rendimento  estimado  em  espectrofotômetro  em comprimentos onda de 260, 280 e 320 nm. 

Para avaliar a qualidade de amplificação via PCR  foram  utilizados  três  iniciadores  do  marcador  molecular  RAPD.  Os  resultados obtidos    (ng.μ L-1)    foram:    212±41,93    (i),    34,5±21,74 (ii),    354,83±38,03    (iii), 1024,83±257,38   (iv)   e   115,67±49,89   (C).   Todos   os   tratamentos   de   conservação apresentaram  quantidade  de  DNA  suficiente  e  de  boa qualidade  para  realização  de análises por RAPD-PCR, sendo que o melhor método foi o de conservação em sílica. 

Para acessar ao artigo completo, clique aqui.

Fonte: ResearchGate

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